Оплодотворение яйцеклетки в пробирке

Оплодотворение яйцеклетки в пробирке

Стоимость ЭКО в нашем центре от 84 000 руб до 114 000 руб .

С 1978 года, когда на свет появился первый ребенок «из пробирки», метод ЭКО подарил счастье отцовства и материнства миллионам супружеских пар. Суть процедуры экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) заключается в получении из яичников женщины зрелых яйцеклеток, оплодотворении их сперматозоидами мужа (или по желанию обоих супругов спермой донора), выращивании получившихся эмбрионов в инкубаторе в течение 48-72 часов, и переносе (подсадке) эмбрионов в матку пациентке.

Метод ЭКО применяется:

1. При абсолютном трубном бесплодии (при отсутствии или полной непроходимости маточных труб маточных труб после их удаления по разным причинам).
2. При частичной непроходимости маточных труб.
3. При эндометриозе.
4. При синдроме поликистозных яичников.
5. При тяжелых формах мужского бесплодия (метод ЭКО ИКСИ).
6. При бесплодии неясной причины- идиопатическом бесплодии.
7. При отсутствии эффекта от других методов лечения.

Процедура ЭКО состоит из следующих этапов:

1. Консультация врача-репродуктолога с обследованием супружеской пары и коррекцией выявленных нарушений.
2. Выбора тактики лечения бесплодия.
3. Индукция ( стимуляция) суперовуляции, включая ультразвуковой мониторинг роста и развития фолликулов и развития эндометрия.
4. Трансвагинальная пункция фолликулов с аспирацией их содержимого.
5. Отбор зрелых яйцеклеток ( ооцитов).
6. Обработка спермы мужа с выделением фракции морфологически полноценных активно- подвижных сперматозоидов.
7. Экстракорпоральное оплодотворение яйцеклеток сперматозоидами и культивирование полученных эмбрионов до 120 ч ( до стадии бластоцисты).
8. Перенос эмбрионов в полость матки.
9. Диагностика беременности ранних сроков.

Начало ЭКО со 2-го дня от начала менструации с назначением стимулирующих рост и созревание яйцеклеток препаратов, способствующих множественному росту фоллмкулов в яичниках. Чтобы получить максимальное количество зрелых яйцеклеток, но при этом избежать осложнений, гормональная терапия подбирается индивидуально.

Во время стимуляции проводится неоднократное УЗИ растущих фолликулов в яичниках. Этот мониторинг служит для контроля за количеством и размерами фолликулов, а также толщиной эндометрия. Только таким образом можно выбрать оптимальный момент для пункции фолликулов. Также благодаря наблюдению удается снизить риск осложнений- гиперстимуляции яичников.

Примерно на 10- 12 день менструального цикла незадолго до овуляции проводится процедура трансвагинальной пункции фолликулов под контролем УЗИ: созревшие яйцеклетки извлекают из яичников, для того, чтобы оплодотворить методом ЭКО.

Пункция фолликулов проводится трансвагинально под контролем УЗИ — Риc. 1, 2, 3 (по желанию пациентки используется внутривенный наркоз). Эта процедура не требует госпитализации. После обсуждения результатов пункции пациенты уходят домой. Одновременно с пункцией фолликулов, мужчина сдает сперму, которая будет использована для оплодотворения яйцеклеток. Эмбриолог готовит материал к оплодотворению: производит очистку спермы от примесей, отбирает качественные яйцеклетки. Подготовленную сперму добавляют к яйцеклеткам, помещенным в специальную питательную среду, и оставляют в инкубаторе, где происходит оплодотворение и дальнейшее развитие эмбрионов.

Через 16-18 часов под микроскопом оценивается качество оплодотворения, количество пронуклеусов (должно быть 2) и их морфология. Полиплоидные эмбрионы (с 3 или более пронуклеусами) отбраковываются. Все манипуляции следует проводить быстро и четко.

При дальнейшем культивировании эмбрионов еще через 24 часа оценивается качество дробления ( на этом этапе эмбриоы обычно достигают 4-6 бластомерной стадии).

Еше через 24 часа культивирования эмбрионы достигают 8-10 клеточной стадии.

На этом этапе эмбрионы можно переносить в полость матки пациентке. Однако в последние годы с появлением новых культивационных сред появилась возможность дальнейшего культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты (5 дневные эмбрионы).

Не все эмбрионы достигают стадии бластоцисты – часть из них останавливается на промежуточных стадиях развития. И таким образом, сама природа нам подсказывает какие эмбрионы самые жизнеспособные и имеющие максимальные шансы имплантации.

Перенос эмбрионов в полость матки (Рис. 8, 9, 10) – совершено безболезненная процедура. Перенос эмбрионов происходит с помощью очень тонкого мягкого пластмассового катетера, который через влагалище и цервикальный канал вводится в матку.

После переноса эмбрионов в полость матки назначают препараты прогестерона и иногда эстрогены, чтобы создать гормональный фон, максимально способствующий имплантации. В этом случае говорят о поддержке лютеиновой фазы.

На 9-12 день после переноса эмбрионов необходимо сдать анализ крови на ß-ХГЧ, по уровню которого можно судить о наличии беременности.

В случае положительного результата пациентке назначается УЗ-исследование через 21 день после подсадки эмбрионов. Исследование позволяет диагностировать маточную беременность.

Как проходит ЭКО поэтапно

Этап 1: Диагностика бесплодия

Диагноз бесплодие ставится при отсутствии беременности в течение 1 года регулярной половой жизни без использования контрацепции. Если женщине более 35 лет, этот срок уменьшается до 6 месяцев. Следовательно, при отсутствии беременности в течение 1 года у женщин до 35 лет и 6 месяцев у женщин старше 35 лет необходимо обратиться к врачу-репродуктологу.

Причины бесплодия могут быть связаны с нарушениями здоровья как у женщин, так и у мужчин. Среди возможных причин женского бесплодия могут быть:

• Отсутствие овуляции (например, при синдроме поликистозных яичников, преждевременном истощении яичников);
• Непроходимость маточных труб;
• Заболевания матки (эндометриоз, миома матки, пороки развития матки);
• Заболевания шейки матки (цервицит, сужение канала шейки матки);
• Иммунологические нарушения (например, наличие антиспермальных антител);
• Бесплодие неясного происхождения;
• Сочетанное бесплодие (при наличии как женского, так и мужского факторов).

К причинам мужского бесплодия относят:

• Различные врожденные аномалии яичек (гипогонадизм или недоразвитие яичек, крипторхизм или неопущение яичек в мошонку, врожденное отсутствие яичек);
• Бесплодие, связанное с воздействием вредных факторов (инфекций, радиации, длительное охлаждение);
• Травмы;
• Варикоцеле (расширение вен семенного канатика и яичка);
• Бесплодие неясного происхождения

Этап 2: Подготовка к ЭКО

ЭКО – это сложная и многоэтапная процедура, которая требует как физической, так и моральной подготовки. На консультации доктор обязательно рекомендует вам подготовить организм к беременности. А это значит отказаться от всех вредных привычек, распределить физические нагрузки и полноценно питаться.

Психологическая подготовка наиболее важна. Необходимо настроиться на многоэтапное лечение и быть готовым к возможному неудачному исходу. Самое важное во время процедуры это позитивный настрой и вера в успех!

Для того, чтобы убедиться в возможности проведения процедуры ЭКО, как мужчина, так и женщина должны пройти ряд обследований и сдать анализы.

Список необходимых обследований для пациентов, вступающих в программу ЭКО, утвержден приказом Минздрава РФ №107н от 30.08.2012. Ниже приведен их полный список.

Анализы для мужчин

• Спермограмма. Делается после полового воздержания в течение 3-5 дней. За 10 дней до сдачи анализа необходимо исключить алкоголь, антибиотики и тепловые процедуры. Анализ действителен в течение 6 месяцев;
• Мазок на флору из уретры. Действителен 1 мес;
• Мазки на инфекции: хламидии, цитомегаловирус, герпес, генитальные уреаплазмы и микоплазмы. Действительны 6 мес;
• Анализы крови на ВИЧ, гепатиты В и С, сифилис. Действительны 3 мес.

Анализы для женщин

• Консультация эндокринолога;
• Исследование маточных труб на проходимость c помощью гистеросальпингографии, ультразвуковой гистероальпингоскопии или лапароскопии;
• Группа крови и резус-фактор. Бессрочный;
• Клинический анализ крови. Действителен 1 мес;
• Гемостазиограмма (коагулограмма). Действителен 1 месяц;
• Биохимический анализ крови. Действителен 1 месяц;
• Общий анализ мочи. Действителен 1 месяц;
• Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С. Действительны 3 месяца;
• Анализ крови на гормоны: ФСГ, ЛГ, эстрадиол, пролактин, тестостерон, ТТГ, Т4 свободный, ДГЭА, АМГ (на 2-3 день менструального цикла. Прогестерон на 21-й день цикла.) Действительны 6 мес;
• Исследования крови на TORCH (IgM, IgG к токсоплазме, вирусу краснухи, цитомегаловирусу, вирусу простого герпеса). Действительны 6 месяцев;
• Мазок на флору из цервикального канала и степень чистоты влагалища. Действителен 1 месяц;
• Цитологическое исследование соскоба с шейки матки. Действителен 1 год;
• Мазки на инфекции: хламидии, цитомегаловирус, герпес, генитальные уреаплазмы и микоплазмы. Действительны 6 мес;
• Заключение терапевта о состоянии здоровья и возможности вынашивания беременности. Действительно 1 год;
• Флюорография или рентген лёгких. Действительна 1 год;
• ЭКГ. Действительна 1 месяц;
• Ультразвуковое исследование молочных желез у пациенток до 35 лет, после 35 лет маммография. Действительно 1 год;
• Заключение маммолога о возможности стимуляции яичников.

При необходимости врач может назначить дополнительные исследования.

На сегодняшний день центр репродукции и генетики Нова Клиник – одна из ведущих клиник, занимающихся решением проблем бесплодия. Центр объединяет специалистов высочайшего уровня, знаний, навыков с целью обеспечения качественной медицинской помощи в лечении бесплодия.

В центре репродукции и генетики Нова Клиник используются только современные методики лечения с доказанной эффективностью. Эмбриологическая лаборатория центра имеет сертификат внешней оценки качества Великобритании NEQAS, что гарантирует высокое качество эмбриологического этапа ЭКО.

Этап 3: Стимуляция суперовуляции

Для того, чтобы получить больше яйцеклеток для последующего оплодотворения проводят стимуляцию яичников. Этот процесс также называется «стимуляцией суперовуляции».

Чтобы добиться созревания большего количества яйцеклеток назначают ежедневные инъекции гонадотропинов – гормонов, которые приводят к созреванию сразу нескольких яйцеклеток, а не одной, как при обычном менструальном цикле.

Длительность этого этапа зависит от выбора протокола стимуляции. Пункция фолликулов обычно приходится на 12-14 день, реже на 13-18 день цикла. Режим стимуляции (протокол, дозы препаратов) подбираются индивидуально. Контроль созревания фолликулов происходит под контролем УЗИ. Стимуляция овуляции проходит под тщательным контролем врача.

Основная цель Нова Клиник – помочь бесплодной паре стать родителями здорового ребенка. Все методы обследований, назначаемые докторами центра, клинически обоснованы и регламентированы приказом Минздрава РФ.

В центре применяется ЭКО с персонифицированной стимуляцией овуляции. При этой процедуре врач, согласно результатам специального анализа на основе фармакогенетики, подбирает индивидуальную схему стимуляции.

Этап 4: Пункция фолликулов

При достижении фолликулами зрелости необходимо сделать специальный укол – ввести триггер финального созревания яйцеклеток. Пункция фолликулов и получение яйцеклеток проводится через 35-36 часов после введения триггера, только по истечению этого времени возможно получить зрелые яйцеклетки.

Процедура проводится под наркозом и контролируется с помощью УЗИ. Врач с помощью специальной иглы проводит забор фолликулярной жидкости и передает материал эмбриологу. Эмбриолог отбирает яйцеклетки для дальнейшего оплодотворения. Чем больше яйцеклеток будет получено, тем лучше. Неиспользованные в протоколе яйцеклетки могут быть заморожены на несколько лет и использованы в повторной попытке ЭКО.

Этап 5: Оплодотворение яйцеклеток

Полученные яйцеклетки и сперматозоиды помещают в специальный инкубатор, в питательный раствор при температуре 37° С и высокой влажности. Здесь и происходит оплодотворение.

В некоторых случаях эмбриологи прибегают к интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ). При этой методике эмбриолог отбирает наиболее перспективный сперматозоид и внедряет его в цитоплазму яйцеклетки. К процедуре прибегают при низком качестве эякулята или яйцеклеток или использовании «замороженных» яйцеклеток.

Этап 6: Культивирование эмбрионов

Этап 7: Перенос эмбрионов

Этап 8: Контроль и поддержка беременности

Популярные вопросы и ответы

Кому подходит

Новые технологии

Как часто бывают неудачные попытки

ЭКО, конечно же, не гарантирует стопроцентное наступление беременности. В настоящее время эффективность ЭКО составляет около 30-35% у пациенток в возрасте младше 35 лет. В возрасте старше 35 лет этот процент составляет менее 30%. Поэтому неудачные попытки ЭКО встречаются, увы, довольно часто. Больше половины пациентов после первой попытки уходят из клиники, к сожалению, с отрицательным результатом.

С возрастом естественная фертильность женщины снижается. Особенно заметно это происходит после 38 лет. Точно так же с возрастом будет снижаться и частота успешных циклов ЭКО. По мнению врачей, все дело в том, что с увеличением возраста у женщины созревает меньшее количество яйцеклеток и эти яйцеклетки худшего качества, что при оплодотворении способствует образованию генетически нездоровых эмбрионов.

Возраст мужчины также влияет на успешность ЭКО, но в гораздо меньшей степени.
Также на исход процедуры влияет количество полученных ооцитов, овариальный запас женщины.

Результативность программ ЭКО в Центре репродукции и генетики Нова Клиник составляет 53%. И это выше вероятности беременности при естественном зачатии у здоровой пары, составляющей 25% в расчете на цикл.

Индивидуальные схемы индукции овуляции, включая методики минимальной стимуляции и модифицированные протоколы, позволяют проводить процедуры ЭКО, сводя к минимуму возможность осложнений и повышая эффективность терапии.

Сколько стоит процедура и кто оплачивает

«В нашей стране возможно бесплатное проведение программы ЭКО за счёт средств обязательного медицинского страхования», — отмечают врачи гинекологи-репродуктологи — «Права на ЭКО по ОМС имеет женщина с диагнозом бесплодие, как состоящая в официальном браке, так и с партнером вне брака. А также одинокая женщина с диагнозом бесплодие, или женщина, супругу (партнёру) которой выставлен диагноз бесплодие.

В процедуре ЭКО по полису ОМС может быть отказано по некоторым причинам: при низком овариальном резерве, т.е. когда в яичниках мало яйцеклеток, и для наступления беременности требуются донорские яйцеклетки.

По полису ОМС бесплатно возможно только проведение базовой программы ЭКО со стимуляцией суперовуляции (со своими половыми клетками). Донорские программы (с использованием донорских яйцеклеток, донорских эмбрионов), программы с использованием суррогатной матери не оплачиваются из фонда ОМС. Без стимуляции в виду различных причин, программа оплачивается пациентами самостоятельно.

Процедуру ЭКО при отказе по ОМС или при желании можно пройти платно.

Стоимость базовой процедуры ЭКО в среднем составляет около 170 000-200 000 рублей.

В неё входит все четыре этапа ЭКО с препаратами для стимуляции при условии использования своих собственных половых клеток. Донорские яйцеклетки и донорская сперма оплачиваются отдельно.

Стоимость 1 яйцеклетки составляет от 20 тыс рублей. Стоимость донорской спермы от 12000 до 35000 рублей за 1 порцию.

Предимплантационная генетическая диагностика эмбрионов, позволяющая исключить генетические заболевания у эмбриона, оплачивается отдельно. А также биопсия трофэктодермы эмбрионов за биопсию всех эмбрионов.

Перенос ранее замороженных эмбрионов можно проводить как бесплатно по ОМС, так и на коммерческой основе.

Стоимость разморозки эмбриона и переноса его в матку обходится в среднем от 35 до 50 тысяч рублей».

Экстракорпоральное оплодотворение

Экстракорпоральное оплодотворение — это медицинская технология преодоления бесплодия, при которой оплодотворение яйцеклетки совершается в искусственных условиях вне организма матери. Сам термин переводится с латинского как «оплодотворение вне тела»: extra — ‘вне’, corpus — ‘тело’.

Изначально экстракорпоральное оплодотворение было разработано для преодоления бесплодия у женщин с отсутствием маточных труб. Как правило, трубы отсутствуют после хирургического удаления внематочной беременности. До эпохи ЭКО женщина, пережившая две внематочные беременности, лишенная обеих маточных труб, не имела шансов родить ребенка. Именно по трубам сперматозоиды плывут к яйцеклеткам для оплодотворения. Организовать встречу сперматозоида и яйцеклетки «в пробирке» видилось решением проблемы. Сейчас ЭКО применяют при самых разных формах бесплодия.

Первая беременность, осуществленная с помощью экстракорпорального оплодотворения, была достигнута в Великобритании в ноябре 1977 года. В результате этой процедуры в 1978 году родился первый в истории Земли человек, зачатый «в пробирке», — девочка Луиза Браун. Сейчас Луиза Браун — взрослая женщина, имеющая двоих детей, зачатых естественным путем. Врачи, которые впервые успешно осуществили ЭКО, признаны основоположниками технологии искусственного оплодотворения — гинеколог Патрика Стептоу и эмбриолог Роберт Эдвардс. В технологии экстракорпорального (или искусственного) оплодотворения всегда участвуют два специалиста: гинеколог и эмбриолог. Гинеколог работает с женщиной, а эмбриолог — с половыми клетками и эмбрионами. За развитие технологии экстракорпорального оплодотворения в 2010 году Роберт Эдвардс получил Нобелевскую премию в области физиологии или медицины.

В СССР рождение первого ребенка после ЭКО произошло в 1986 году. Процедуру ЭКО осуществили в Москве в Центре охраны здоровья матери и ребенка (ныне Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии МЗ РФ) гинеколог Елена Андреевна Калинина и эмбриолог Валентин Алексеевич Лукин. У первого советского ребенка «из пробирки» Елены Донцовой в этом году юбилей — 30 лет. Сейчас она проживает на Украине, является мамой 9-летнего сына, зачатого естественным путем. За прошедшие 30 лет технология ЭКО ушла далеко от своих истоков, и все же она по-прежнему несовершенна. По данным Европейского общества эмбриологии и репродукции человека, лишь 33% пациенток становятся беременными после переноса в матку эмбриона, полученного «в пробирке». Впрочем, в природе вероятность беременности сходная — более 60% эмбрионов человека погибает в течение первых 7 суток развития. В таких случаях не происходит задержки менструации, и женщина не догадывается, что в ее матке присутствовал эмбрион, который погиб. В этом смысле процедура ЭКО нисколько не ущербнее естественного зачатия.

Экстракорпоральному оплодотворению предшествует гормональная подготовка пациентки. В естественных условиях в течение одного менструального цикла женщины созревает лишь одна яйцеклетка, но для эффективной программы ЭКО этого мало. Поэтому с помощью гормональных препаратов врач стимулирует развитие нескольких яйцеклеток. Оптимальным для ЭКО считается количество 6–8 яйцеклеток. Увидеть развивающиеся яйцеклетки в организме женщины невозможно. С помощью УЗИ врач видит растущие фолликулы — шарообразные образования в яичниках, внутри которых содержатся яйцеклетки. Зрелые фолликулы достигают диаметра около 2 см, в то время как яйцеклетка имеет диаметр около 0,1 мм.

Отбор половых клеток

В определенный день происходит забор яйцеклеток — эту процедуру проводят, как правило, под общей анестезией. С помощью шприца с тонкой длинной иглой врач-гинеколог отбирает фолликулярную жидкость и отдает ее специалисту-эмбриологу для поиска яйцеклеток. Увидеть яйцеклетки в фолликулярной жидкости можно только под микроскопом. Найденные яйцеклетки отмывают от фолликулярной жидкости и помещают в чашечки с культуральной средой. Культуральная среда представляет собой раствор множества необходимых физиологических компонентов: солей, сахаров, аминокислот, витаминов, белков — всего около 40 веществ. В такой среде яйцеклетки, сперматозоиды и эмбрионы чувствуют себя «как дома». Чашечку со средой, в которую помещают яйцеклетки (а потом эмбрионы), держат в инкубаторе — специальном шкафу, внутри которого поддерживается температура 37 °С и уровень углекислого газа 6%.

Для искусственного оплодотворения нельзя использовать сперму «как она есть» (специалисты называют это нативной спермой): семенная жидкость испортит среду и погубит яйцеклетки. Необходимо выделить из спермы подвижные сперматозоиды (в сперме любого здорового мужчины большая часть сперматозоидов неподвижна) и перевести их в культуральную среду, очистив от семенной жидкости. Для этого эмбриологи используют многократное центрифугирование с постепенной заменой сред. Полученную суспензию сперматозоидов в среде можно использовать для искусственного оплодотворения.

Собственно экстракорпоральное оплодотворение проводят одним из двух методов. Первый метод называется «инсеминация in vitro» и состоит в следующем: суспензию сперматозоидов добавляют в чашечку с яйцеклетками. Сперматозоиды самостоятельно плывут и оплодотворяют яйцеклетки. Но увидеть процесс проникновения под микроскопом не удается: яйцеклетку облепляют сотни или даже тысячи сперматозоидов, они разрыхляют оболочки яйцеклетки, производя большое количество «мусора». Процесс занимает около двух часов — наблюдать все это время в микроскоп нельзя: яйцеклетки должны находиться в инкубаторе.

Если сперма очень плохая и сперматозоиды неспособны самостоятельно доплыть и оплодотворить яйцеклетки, то применяют второй метод, который называется ИКСИ (от англ. ICSI — intracytoplasmic sperm injection — введение сперматозоида в цитоплазму). При этом методе отбирают под микроскопом самый «красивый» сперматозоид, ловят его с помощью стеклянной иглы и вводят внутрь яйцеклетки — таким образом оплодотворяют. Метод ИКСИ дает более стабильные результаты, поэтому постепенно он вытесняет метод инсеминации in vitro из практики ЭКО.

О результатах оплодотворения судят на следующий день — только тогда можно будет сказать, успешно ли прошло оплодотворение. Оплодотворенную яйцеклетку называют зиготой — это одноклеточная стадия развития человека. В зиготе должны сформироваться два ядра — мужское и женское (так называемые пронуклеусы). Мужское ядро содержит хромосомы отца, женское — хромосомы матери. Ядра в зиготе появляются спустя 12–15 часов после проникновения сперматозоида в яйцеклетку и остаются видны в течение приблизительно 8 часов. После исчезновения пронуклеусов хромосомы отца и матери объединяются в единую «метафазную пластинку», и с этого момента во всех ядрах будущих клеток эмбриона (а затем и человека) хромосомы отца и матери будут находиться вместе. В этот короткий промежуток (около 8 часов, большая часть которых приходится на ночь), когда видны ядра зиготы, необходимо рассмотреть эмбрионы, чтобы зафиксировать, что оплодотворение прошло успешно. Если в зиготе нет пронуклеусов или видны три пронуклеуса, то такой эмбрион нельзя пересаживать матери.

На протяжении последующих пяти дней эмбрионы продолжают культивировать в инкубаторе, ежедневно наблюдая за их развитием. Развитие происходит очень быстро, каждый день приносит что-то новое. На второй день после оплодотворения эмбрион состоит из четырех клеток, его размер по-прежнему около 0,1 мм (такой же, как размер яйцеклетки). На третий день количество клеток увеличивается до восьми, но эмбрион не растет — просто клетки становятся мельче. На четвертый день эмбрион состоит уже из 10–20 клеток, но и теперь размер его прежний — около 0,1 мм, а клетки стали еще мельче. Из-за постоянного разделения эмбриона на все мелкие клетки эту стадию развития называют «дробление эмбриона». Эмбриону некогда расти, он не тратит на это время. Его задача сейчас — создать клеточную массу, из которой в последующие дни начнется морфогенез — образование формы тела. Пока эти 10–20 клеток представляют собой бесформенную массу, они все одинаковы по размеру, внешнему виду, биохимическим особенностям и прочим параметрам, но уже завтра, на пятый день, из этой однородной массы клеток начнется процесс «лепки» тела будущего человека. На пятый день количество клеток возрастает до 50–80, эмбрион формирует из них подобие шара — так называемую бластоцисту. Этот шар уже чуть больше по размеру — 0,15 мм, и он имеет внутри так называемый эмбриобласт — особую группу клеток, из которой сформируется тело будущего новорожденного.

Как правило, на стадии бластоцисты эмбрион переносят в матку женщине в надежде на то, что он сможет прикрепиться к стенке матки (специалисты называют этот процесс имплантацией). Если оставить эмбрион культивироваться дальше, то на шестые сутки мы увидим, как бластоциста вылупляется из своей белковой оболочки (эта оболочка досталась бластоцисте еще от яйцеклетки). Еще около суток бластоциста может оставаться без блестящей оболочки в чашечке в условиях инкубатора, но, не найдя стенку матки, она погибает.

В матку женщине переносят, как правило, два эмбриона. Это лучшие эмбрионы, отобранные по разным критериям. Но даже перенос двух эмбрионов лишь в трети случаев приводит к беременности. Почему же не наступает беременность при переносе эмбрионов в матку? Как уже было сказано выше, сходная частота беременности показана и для естественных условий зачатия. Около 60% всех беременностей, зафиксированных с помощью анализа крови на хорионический гонадотропин (этот гормон выделяет в кровь матери эмбрион), останавливаются до задержки менструации. Такую беременность можно зафиксировать только методом анализа крови на хорионический гонадотропин. Не проводя такого анализа, женщина не может догадаться о прервавшейся беременности. Эти данные означают, что в естественных условиях около 60% эмбрионов, достигших стадии бластоцисты, не могут осуществить имплантацию и погибают. Почему в природе так устроено? Точного ответа не существует.

Известно, что при формировании половых клеток происходит множество ошибок, большая часть половых клеток человека непригодна для нормального формирования эмбриона. Сперматозоиды при прохождении женских половых путей проходят очень жесткий отбор. Из нескольких десятков миллионов сперматозоидов, попадающих в женское влагалище при половом акте, лишь несколько сотен доплывают до места оплодотворения — маточной трубы. Это один из ста тысяч. В женском организме существуют специальные барьеры, которые сперматозоидам нужно преодолеть, — это прежде всего «истмус» и «цервикс». Яйцеклетки же подвергаются отбору уже после оплодотворения — лишь треть оплодотворенных яйцеклеток способны развиться в бластоцисту, которая сможет имплантироваться в матку, две трети яйцеклеток не могут сформировать нормальный эмбрион и останавливаются в развитии.

К сожалению, не всегда по внешнему виду эмбриона можно определить его «потенциал к развитию», который во многом определяется генетической нормальностью эмбриона. В настоящее время существуют методы молекулярной биологии, позволяющие определить «здоровую генетику» у эмбриона. Это так называемая преимплантационная генетическая диагностика, или ПГД. Для осуществления этой процедуры у эмбриона отбирают одну из его клеток (как показано, забор части материала не вредит эмбриону) и проводят анализ ДНК. По результатам такого анализа можно определить, нормальное ли количество хромосом в клетках эмбриона, выявить определенные мутации. К сожалению, из-за технической сложности и высокой себестоимости данная процедура проводится не во всех медицинских центрах и не всякой супружеской паре.

Если в программе ЭКО получено более двух эмбрионов хорошего качества, то часть из них, не отобранных для переноса в матку, можно заморозить с целью хранения. В дальнейшем их могут разморозить и перенести в полость матки для достижения беременности. Это происходит в том случае, если беременность не наступила или же если пациентка уже родила ребенка и хочет родить второго, третьего, четвертого. Замораживание эмбрионов сегодня хорошо отработанная процедура. Выживаемость эмбрионов после размораживания составляет около 96%. Хранение в замороженном виде осуществляют в жидком азоте при температуре -196 °С. Эмбрионы закупоривают в миниатюрные пластиковые трубочки и погружают в жидкий азот, налитый в гигантские термосы — так называемые сосуды Дьюара. Теоретически в таком состоянии эмбрионы могут сохраняться жизнеспособными на протяжении многих сотен, а может быть, даже тысяч лет. Но достоверно показано достижение беременности после переноса в матку размороженного эмбриона, пролежавшего в жидком азоте около 20 лет (США). Эмбрион нельзя погрузить в жидкий азот просто так — это губительно для любой живой клетки. Необходимо предварительно насытить клетки эмбриона так называемыми криопротекторами — веществами, препятствующими образованию кристаллов льда. В настоящее время в качестве криопротекторов обычно используют этиленгликоль, глицерин и диметилсульфоксид.

Согласно данным Российской ассоциации репродукции человека (РАРЧ), в России в 2013 году было проведено около 65 тысяч процедур ЭКО, по результатам которых было достигнуто чуть менее 20 тысяч беременностей, из которых 13,5 тысяч закончились родами. На территории России действует более 200 медицинских центров, осуществляющих процедуру ЭКО. Подробную статистику можно найти на сайте РАРЧ.

Автор: Роман Шафеи
кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник кафедры эмбриологии биологического факультета МГУ

Оплодотворение яйцеклетки в пробирке

Для женщины невозможность родить малыша часто становится огромной психологической травмой. Чего только женщины не предпринимают для того, чтобы забеременеть. Эта книга поможет каждой женщине, планирующей стать мамой, исполнить свое заветное желание.

Ольга Панкова, акушер-гинеколог, расскажет, как подготовиться к беременности, как рассчитать наиболее благоприятный день для зачатия и «поймать» овуляцию, чтобы выносить и родить здорового малыша. В книге представлена подробная информация о том, как устранить причины, препятствующие наступлению зачатия: поликистоз яичников, эндометриоз, миома матки, гипотиреоз, непроходимость маточных труб.

Автор расскажет о современных вспомогательных репродуктивных технологиях и восточных рецептах естественного зачатия, которые, взаимно дополняя друг друга, помогут многим читательницам обрести радость материнства.

Книга: Бесплодие – не приговор!

Основные этапы оплодотворения в «пробирке»

Основные этапы оплодотворения в «пробирке»

Суть методики ЭКО состоит в следующем: яйцеклетку извлекают из организма женщины и оплодотворяют искусственно «в пробирке». Полученный эмбрион развивается в течение 2–5 дней в условиях инкубатора, после чего его переносят в полость матки для дальнейшего развития. Для выполнения ЭКО следует обратиться в специализированную клинику. Выполнение процедуры проходит в несколько этапов.

1-й этап. «Стимуляция суперовуляции». В норме у женщины в течение одного менструального цикла созревает одна яйцеклетка. Для получения надежного результата необходимо несколько яйцеклеток. Для их одновременного созревания и выхода из яичника («суперовуляция») проводят гормональную стимуляцию. Существует несколько схем стимуляции суперовуляции. Количество, типы и длительность введения препаратов подбирают индивидуально.

2-й этап. Получение яйцеклеток. За зреющими яйцеклетками наблюдают, проводя динамическое ультразвуковое исследование. Когда они достигают определенного размера (16–20 мм), проводят пункцию фолликулов яичника. Показателями завершенности индукции суперовуляции являются диаметр лидирующего фолликула или нескольких фолликулов более 17 мм и толщина эндометрия 8 мм и более. О степени зрелости фолликулов судят по концентрации эстрадиола в плазме крови.

В день пункции фолликулов женщине категорически запрещается принимать любую пищу и пить жидкость с определенного времени, которое точно вам скажет только врач.

Пункция выполняется либо под внутривенным, либо под местным обезболиванием. Иглу вводят через влагалище. Манипуляция осуществляется под контролем УЗИ. Во время пункции аспирируют содержимое фолликулов и ищут под микроскопом яйцеклетки.

Обнаруженные яйцеклетки отмывают от фолликулярной жидкости и «переселяют» в лабораторную посуду со специальной средой. Чашку, в свою очередь, помещают в инкубатор, где яйцеклетки ждут своего «звездного часа» – оплодотворения.

При невозможности получить яйцеклетки у пациентки (в случае отсутствия у нее яичников или по причине менопаузы и пр.) используют донорские яйцеклетки.

3-й этап. Получение спермы. Мужчине за 3–4 дня до процедуры рекомендуется воздержание от половой жизни и алкоголя. Сперму пациент получает самостоятельно с помощью мастурбации. В случае невозможности получения спермы путем эякуляции используют хирургические методы.

Предпочтительнее получать сперму в день пункции фолликулов супруги. Если она получена накануне, ее следует заморозить и хранить в жидком азоте. Перед оплодотворением яйцеклетки сперматозоиды отделяют от семенной жидкости с помощью центрифугирования.

При невозможности использования спермы мужа по медицинским показаниям или при отсутствии у пациентки полового партнера, возможно применение спермы донора. После забора ее хранят в замороженном состоянии не менее 6 месяцев, за этот период уточняя данные об отсутствии инфекционных заболеваний у донора.

4-й этап. Собственно оплодотворение «в пробирке» проводят врачи-эмбриологи в условиях эмбриологической лаборатории. Если сперматозоиды «здоровы» и обладают достаточной подвижностью, то их просто добавляют к яйцеклеткам в чашку из расчета 100–200 тысяч на одну яйцеклетку.

В течение 2–3 часов один из сперматозоидов проникает в яйцеклетку и оплодотворяет ее. Вероятность успешного результата составляет 60–70 %. После проникновения сперматозоидов в яйцеклетки они становятся эмбрионами. Их содержат в искусственных условиях от 2 до 5 дней. За время инкубации эмбрионы практически не увеличиваются: в 1-й день их размер равен 0,1 мм, на 5-й день – 0,15–0,2 мм.

5-й этап. Перенос эмбриона в матку. Через 2–5 дней после оплодотворения яйцеклетки эмбрионы переносят на «постоянное место жительства» – в матку. В день переноса эмбрионов для женщины ограничений по приему пищи и воды нет.

Процедуру проводят специальным эластичным катетером на гинекологическом кресле в течение нескольких минут без обезболивания. Обычно подсаживают от 2 до 4 эмбрионов.

Игла с мандреном может быть введена в полость матки через влагалище или живот. В редких случаях непреодолимого нарушения проходимости цервикального канала перенос эмбрионов может быть выполнен через стенку матки.

6-й этап. Гормональная поддержка. В дальнейшем лютеиновую фазу стимулированного менструального цикла поддерживают препаратами прогестерона или его аналогами. Беременность ранних сроков диагностируют по содержанию ХГ (хорионического гонадотропина) в крови или в моче через 12–14 дней от момента переноса эмбрионов. Ультразвуковая диагностика беременности может уверенно проводиться с 21-го дня после переноса эмбрионов.

Успешность ЭКО составляет 35–50 %, то есть каждая третья, а то и вторая женщина с бесплодием МОЖЕТ стать мамочкой!

Как «ребенок из пробирки» выглядит в пробирке?

Как происходит развитие эмбриона вне организма матери во время ЭКО

Сегодня все знают, что беременность, наступившая после экстракорпорального оплодотворения, ничем не отличается от естественной. Но одно важное отличие все же существует – первые несколько дней будущий малыш проводит вне материнского организма, в той самой «пробирке».

Что происходит с эмбрионом в эти важные сутки?

День 0

«Нулевым днем» считается момент забора яйцеклетки, готовой к оплодотворению. В ходе пункции из фолликула отбирается жидкость, содержащая яйцеклетки. Сами ооциты (собственно, яйцеклетки), отделяются от фолликулярной жидкости в лаборатории. Специалист помещает их в особую питательную среду, внимательно изучает и, убедившись что клетки не повреждены, через несколько часов помещает их в концентрированную сперму (либо отправляет на криозаморозку, чтобы использовать в будущем).

День 1

Приблизительно через 16-20 часов после того, как яйцеклетка была помещена в среду сперматозоидов, эмбриолог проводит оценку оплодотворения. Как он определяет, возможно ли зарождение новой жизни? По пронуклеусам, или предшественникам ядра: в оплодотворенной яйцеклетке их должно быть два. Один содержит генетический материал матери, другой – отца. Если в яйцеклетке оказывается один, три или вовсе ни одного пронуклеуса, то такая клетка выбраковывается.

” Пронуклеусы еще располагаются на некотором расстоянии, но постепенно движутся навстречу друг другу, и итогом этой встречи станет зигота – первая клетка будущего человека, содержащая полный двойной набор хромосом. Впрочем, это вопрос не первого, а второго дня…

День 2

Именно на второй день можно говорить о том, что из яйцеклетки и сперматозоида образовалась новая жизнь: произошло первое дробление зиготы, и будущий малыш — это две-четыре клетки-бластомера. Бластомеры, возникающие при первоначальном делении зиготы – не совсем обычные клетки: они обходятся без стадии клеточного роста, то есть эмбрион состоит из всё большего числа клеток, а вот его размер почти не увеличивается.

” Это очень важный день для мамы и будущего малыша: в этот момент происходит первый (а иногда и единственный) отбор эмбрионов для имплантации. Об их жизнеспособности судят по объему безъядерных фрагментов: чем их меньше, тем лучше.

Специалисты различают четыре типа эмбрионов.

Тип А — эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов.

Тип В — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20%.

Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50%.

Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50%.

День 3

Эмбриологи – эмбриологами, но у природы есть свой, естественный отбор. На третий день эмбрион, развивавшийся до этого «по инерции», на материнском генетическом материале, активирует собственный геном. Если в нем имеются грубые нарушения (по разным данным – таких эмбрионов от 4 до 18%), то развитие останавливается.

” Развивайся эмбрион в организме будущей мамы, в этот день он бы вышел из фаллопиевой трубы в полость матки. Конечно, возникает вопрос, комфортно ли ему «in vitro», «в стекле», так же, как было бы в естественной среде?

В начале прошлого века эмбрионы пытались культивировать в физрастворе, и эта среда, действительно, оставляла желать лучшего. «Лучшее» появилось в 1985 году, когда в среду для выращивания эмбрионов впервые добавили растворимый белок альбумин. С тех пор среда, в которую помещали эмбрионы, непрерывно совершенствовалась и усложнялась.

День 4

Ранее эмбрион был хаотичным скоплением клеток, но на четвертый день он — уже морула. Morula в переводе с латыни – шелковица, и действительно, клетки формируют плотный ровный шар, напоминающий ягоду этого растения, или, если хотите, малины. Пространства между отдельными клетками становится меньше, поверхность «ягодки» сглаживается, внутри намечается полость – эмбрион готовится прикрепляться к стенке матки.

” Поскольку при естественном течении беременности эмбрион в этот момент находится в матке, а не в фаллопиевой трубе, ему требуется уже другая внешняя среда. Долгое время считалось, что можно искусственно выращивать эмбрион только до четвертого дня, однако сегодня, чтобы выиграть еще пару суток, его просто помещают в новую среду.

День 5

Морула меняется не по дням, а по часам. Вскоре половина ее объема составляет полость, а клетки, из которых она состоит, состоят из внешнего слоя трофобласта (он отвечает за внедрение в ткань матки и образование плаценты) и плотной клеточной массы – собственно, будущего малыша. Теперь это уже не морула, а бластоциста. При естественном течении беременности полость бластоцисты медленно расширяется, внешняя оболочка рвется, и начинается процесс имплантации, на который потребуется еще день или два.

” Ученые до сих пор не пришли к единому мнению, почему при искусственном оплодотворении до стадии бластоцисты «доживает» только около 40% эмбрионов: виной ли тому искусственная среда обитания, или это проявление генетической неполноценности некоторых из них. Но, в любом случае, выживают только лучшие из лучших, да и среди них врачи продолжают вести тщательный отбор. На этот раз – посредством генетического анализа: эмбрион уже достаточно велик, чтобы можно было изъять из него несколько клеток и проверить на генетические заболевания.

Когда лучше подсаживать эмбрион?

Подсадка возможна в любой день, с первого по шестой, и каждого выбора есть свои плюсы и минусы. Если поместить эмбрион в матку рано, на первый или второй день, то возможное негативное влияние искусственной среды будет минимизировано, но ведь и полость матки на таком сроке для будущего малыша не «дом родной», он должен был бы еще находиться в маточной трубе! К тому же на таком сроке еще невозможно оценить ни качество эмбриона, ни его подверженность генетическим заболеваниям.

На третий день можно уже уверенно отсеять нежизнеспособные эмбрионы, однако, для генетического анализа по-прежнему еще очень рано.

На четвертый, а особенно на пятый день оценить можно все: и жизнеспособность эмбриона, и генетические заболевания, которые он унаследовал. Наконец, именно в этот момент естественно зачатый малыш, а вернее – бластоциста, из которой он вы итоге разовьется, оказывается в полости матки. Так что именно в этот момент подсадка эмбриона наиболее удобна и естественна.

Плохо то, что к этому моменту искусственно оплодотворенные яйцеклетки уже несколько дней борются за жизнь «в пробирке» и больше половины в ходе этого жестокого соревнования «сходят с дистанции». Среди неудачников не только жертвы генетических мутаций, но и вполне здоровые и качественные эмбрионы, которые по неизвестным причинам замирают и останавливаются в своем развитии. Так что к часу «Х» может попросту не дожить ни один эмбрион.

” Так что врачи при выборе дня имплантации руководствуются целым рядом критериев. Если ранее уже были неудачные попытки ЭКО, то обычно пытаются перенести в полость матки «более юные» эмбрионы – третьего или даже второго дня развития, надеясь, что в естественной среде их выживаемость будет выше. Если существует вероятность генетических заболеваний, то подсадку эмбриона стараются оттянуть до того момента, когда будут сделаны достоверные анализы.

Именно поэтому, хотя идеальным днем для подсадки мог бы стать день №4, ее осуществляют только на следующий день, или даже через день.

Наконец, еще один фактор, который приходится учитывать, — психологическое состояние мамы. Чем дольше она ждет переноса эмбриона, тем больше нервничает, и тем меньше шансы на удачную берменность.

Дорогие будущие мамы! Не нервничайте! Мы верим — все у нас получится!

Экстракорпоральное оплодотворение или зачатие в «пробирке». Справка

Нобелевскую премию 2010 года по медицине, вручаемую с 1901 года, получил британский ученый Роберт Эдвардс, создавший технологию искусственного оплодотворения, объявил в понедельник в Стокгольме Нобелевский комитет при Каролинском медицинском институте.

Название этой медицинской технологии происходит от двух латинских слов extra – снаружи и corpus – тело.

Экстракорпоральное оплодотворение, сокращенно ЭКО, впервые в истории человечества было проведено в 1978 г. в небольшом городе Оулдхоме в Англии.

Основателями экстракорпорального оплодотворения считаются кембриджские исследователи – гинеколог Роберт Эдвардс (Robert Edwards) и эмбриолог Патрик Стептоу (Patrick Steptoe). В результате первой операции по экстракорпоральному оплодотворению 25 июля 1978 г. в семье Лесли и Джона Браунов появился долгожданный ребенок – дочь Луиза. До этого Лесли в течение 9 лет безуспешно лечилась от бесплодия, вызванного непроходимостью маточных труб.

Луиза Браун стала первым «ребенком из пробирки», как в последствии стали называть детей, рожденных с помощью этого метода.

Эксперименты по внематочному зачатию врачи начали проводить на животных значительно раньше. Исследования на мышах, начатые в 1955 г., позволили изучить механизм оплодотворения, определить оптимальное время для оплодотворения яйцеклеток в лабораторных условиях. Появилась возможность выявлять наследственные аномалии в эмбрионах до имплантации в матку.

Полученные результаты позволили со временем применить данную методику к человеку. Этому способствовал прогресс в медицине и в смежных с ней науках, например в биологии, а также изобретение современного медицинского оборудования.

Роберт Эдвардс, работающий в Кембриджском университете, начал исследования в сфере искусственного оплодотворения в 1960 г. В 1968 г. он добился оплодотворения человеческой яйцеклетки в лабораторных условиях.

Изучение оптимальный условий извлечения, искусственного оплодотворения и последующего переноса эмбрионов в матку заняли 10 лет. Первая попытка использовать ЭКО в лечении бесплодия была предпринята в 1975 г. и закончилась неудачей: беременность оказалось внематочной.

Благодаря открытию Роберта Эдвардса в мире родилось более миллиона «детей из пробирки». В 2001 г. Эдвардс был удостоен самой престижной американской премии в сфере медицины – Ласкеровской премии.

Методика ЭКО и ПЭ (перенос эмбрионов) технически достаточно сложна и состоит из следующих четырех этапов:

1. Стимулирование созревания яйцеклеток обеспечивается различными гормональными препаратами. По мере роста яйцеклеток производится анализ крови для определения гормональной реакции развивающегося фолликула и ультразвуковой контроль за ростом фолликулов в яичниках.

2. Изъятие ооцитов (яйцеклеток). Эта операция осуществляется либо с помощью лапароскопического метода, либо с помощью аспирационной иглы под ультразвуковым контролем. Лапароскопия проводится с наркозом, путем разреза ниже пупка. Введение аспирационной иглы (через свод влагалища или стенку мочевого пузыря) осуществляется под местной анестезией.

3. Оплодотворение яйцеклеток в культуре. Изъятые яйцеклетки помещают в специальную жидкую среду, куда затем добавляют сперматозоиды. Время первого обследования половых клеток — через 18 часов после введения сперматозоидов.

4. Введение эмбриона в матку. Через 1-3 дня через катетер эмбрион доставляют в полость матки. Неудачная попытка воспроизводится через 3‑4 месяца до четырех раз. Далее целесообразность пользования методом ЭКО и ПЭ, для данного случая, ставится под сомнение.

То есть, для того чтобы сделать ЭКО оба супруга или женщина проходят всестороннее обследование. Делаются анализы: крови – РВ и на СПИД – мазок, спермограмма мужа. Выясняется причина, из-за которой женщина не может забеременеть, что касается будущего отца, то проводятся исследования на способность его к зачатию.

Для начала женщине проводят стимуляцию яичников – это делается с целью получения сразу нескольких зрелых яйцеклеток в течение одного менструального цикла. Это повышает вероятность наступления беременности. Зрелые яйцеклетки извлекаются при помощи пункции. Такую процедуру необходимо производить амбулаторно. После муж сдает сперму.

Ее специальным образом подготавливают: сперматозоиды отмываются от семенной плазмы, потому что именно в семенной плазме содержится фактор, делающий сперматозоиды не способными к оплодотворению. Затем сперматозоиды соединяют с яйцеклетками, происходит оплодотворение, после чего клетки начинают делиться – развивается эмбрион.

Через 2-3 дня он состоит уже из 4-8 клеток и может быть перенесен в матку. Обычно, для страховки переносят одновременно 3-4 эмбриона. «Приживается» один-два. Если жизнеспособными оказываются все перенесенные в матку зародыши, развивается многоплодная беременность. То, что оплодотворение произошло, подтверждается ультразвуковым исследованием.

При зачатии «в пробирке» можно повлиять на здоровье будущего ребенка, контролировать пол плода и исключать некоторые генетические (наследственные) заболевания. Врачи обследуют эмбрион до того, как перенести его в матку. Эмбрионы, несущие ген наследственного заболевания, например, болезни Дауна, «отбраковываются». После того как зародыш прижился и начал развиваться женщина должна наблюдаться в обычной районной женской консультации. Роды при искусственном оплодотворении, лактация и развитие ребенка ничем не отличаются от этих же процессов при традиционном зачатии.

Первым «ребенком из пробирки» в СССР стала жительница города Красный Луч Луганской области Елена Донцова, родившаяся в клинике Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН в 1986 г. С 2006 г. в России в рамках нацпроекта «Здоровье» действует программа бесплатного лечения бесплодия методом ЭКО.

За последние 30 лет бурное развитие медицинских технологий дополнило первоначальную методику ЭКО новыми, более безопасными и эффективными методами изъятия, консервации, оплодотворения яйцеклеток и имплантации эмбрионов. Сейчас техника ЭКО позволяет решить проблему бесплодия не только у женщин, но и у мужчин: для искусственного оплодотворения методом интроцитоплазматической инъекции (ИКСИ) достаточно одного полноценного сперматозоида. Замороженные яйцеклетки могут безопасно храниться на протяжении десятков лет, что дает возможность женщине выбрать оптимальное время для беременности. Криоконсервация яйцеклеток дает надежду на материнство пациенткам, пережившим онкологические заболевания.

Британский ученый Роберт Эдвардс, создавший технологию искусственного оплодотворения получил Нобелевскую премию 2010 г. по медицине.

Материал подготовлен на основе информации открытых источников